国产亚洲AV综合人人澡精品,绝美人妻被夫前侵犯,大香蕉久久,美女色999,97超碰自拍,亚洲av午夜精品一区二区三区 ,100禁毛片免费40分钟视频,欧美精品无码久久久

基因編輯
+
  • 基因編輯

基因編輯

CRISPR-Cas 系統(tǒng)最早在大腸埃希菌中發(fā)現(xiàn)。其功能是用來抵御噬菌體的感染，捕獲來源于噬菌體的間隔序列整合到自身基因組中，以獲得外源抵抗力 。CRISPR-Cas 系統(tǒng)能使基因組免于噬菌體、病毒等的破壞與宿主 Cas 蛋白的獲取抗噬菌體能力有關(guān)。

所屬分類：

基因編輯

聯(lián)系我們

產(chǎn)品描述

CRISPR-Cas 系統(tǒng)最早在大腸埃希菌中發(fā)現(xiàn)。其功能是用來抵御噬菌體的感染，捕獲來源于噬菌體的間隔序列整合到自身基因組中，以獲得外源抵抗力 。CRISPR-Cas 系統(tǒng)能使基因組免于噬菌體、病毒等的破壞與宿主 Cas 蛋白的獲取抗噬菌體能力有關(guān)。

CRISPR 是多種古菌及細(xì)菌處理外來 DNA 侵襲的一種天然免疫系統(tǒng)，利用 Cas 蛋白酶進(jìn)行切割，達(dá)到自身免疫的效果的工具。CRISPR-Cas 基因座由一系列編碼 Cas 蛋白的基因和一個(gè) CRISPR 重復(fù)間隔序列組成。典型的 CRISPR 重復(fù)間隔序列由一段前導(dǎo)序列、一系列短的高度保守的正向重復(fù)序列和間隔序列依序排列組成。2015 年 Makarova 實(shí)驗(yàn)室根據(jù) RNA 與 Cas9 蛋白的分類提出了新的分類系統(tǒng)，把 CRISPR 系統(tǒng)細(xì)分為五種。

目前被最為廣泛應(yīng)用的 CRISPR 系統(tǒng)是CRISPR-Cas9 系統(tǒng)，在構(gòu)建基因編輯動(dòng)物中應(yīng)用廣泛，可直接對(duì)胚胎進(jìn)行編輯。通過利用 CRISPR-Cas9 技術(shù)造成的 DSB 細(xì)胞的修復(fù)機(jī)制將不同的功能的結(jié)構(gòu)域融合到 dCas9 核酸酶上，可以實(shí)現(xiàn)基因敲入和敲除、基因的抑制和激活，以及表觀基因編輯等多個(gè)維度的生物學(xué)過程。CRISPR-Cas9 技術(shù)廣泛應(yīng)用于腫瘤研究、疾病模型、抗病育種、基因功能研究等方面。

在 CRISPR-Cas 基因編輯技術(shù)中，CRISPR-Cas9 基因座由反式激活 crRNA（trans-activating crRNA，tracrRNA）基因、Cas 蛋白基因、CRISPR 序列組成。Cas編碼的蛋白包括 Cas1-Cas10 具有核酸內(nèi)切酶活性，Cas9 蛋白包括 HNH 與 RuvC 兩個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域，HNH 結(jié)構(gòu)域負(fù)責(zé)切割與crRNA互補(bǔ)配對(duì)的靶 DNA鏈，而 RuvC活性中心負(fù)責(zé)切割非互補(bǔ)鏈。

根據(jù)設(shè)計(jì)方案，將Cas9 mRNA、特異性sgRNA顯微注射到 C57BL/6J 小鼠的受精卵中，移植入代孕鼠體內(nèi)，生產(chǎn)出首建鼠（Founder，F(xiàn)0），構(gòu)成全身敲除小鼠（Konck out，KO）?；?qū)as9 mRNA、sgRNA與目的片段通過顯微注射的方式，構(gòu)成外源基因插入的首建鼠，后續(xù)進(jìn)行測序、基因型鑒定等方式驗(yàn)證構(gòu)建成功，交付客戶。

基因編輯鼠包括：轉(zhuǎn)基因（transgenic）、基因敲入(knock in)、基因敲除(knock out)和基因點(diǎn)突變(point mutation)鼠。繁育的鼠是雜合子（同一位點(diǎn)上的兩個(gè)等位基因不相同的基因型個(gè)體）還是純合子（同一位點(diǎn)上的兩個(gè)等位基因相同的基因型個(gè)體）這就需要我們通過基因型鑒定來確定。常見的基因型鑒定方法包括直接PCR、RT-PCR和測序等。這里主要介紹最常用的直接PCR鑒定法。提取鼠的基因組DNA，通過PCR擴(kuò)增DNA，利用DNA電泳根據(jù)條帶大小和條帶數(shù)量差異區(qū)分基因型。

實(shí)驗(yàn)分組包括：

WT Control：用野生型鼠組織或DNA作為對(duì)照，協(xié)助判斷基因型及PCR體系是否合適。

Blank Control：不含有任何組織/DNA的對(duì)照組，用來質(zhì)控PCR體系是否發(fā)生污染。

Internal Positive Control：內(nèi)部對(duì)照，引物通常擴(kuò)增與目的基因無關(guān)的基因組DNA區(qū)域，用來判斷 PCR 體系和模板質(zhì)量是否合適。

Sample：目標(biāo)小鼠組織或DNA，鑒定基因編輯是否成功。

①鼠尾DNA提?。菏褂玫鞍酌窴對(duì)組織進(jìn)行消化，快速釋放基因組DNA。

②PCR擴(kuò)增：配制特異性引物體系，加入DNA聚合酶，通過PCR反應(yīng)擴(kuò)增出目的DNA片段。

③瓊脂糖凝膠電泳：PCR反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，根據(jù)條帶大小和位置判斷野生型、雜合子和純合子，點(diǎn)突變鼠只能通過測序的方法進(jìn)行鑒定。

留言咨詢